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激光共聚焦顯微鏡對于樣品有那些要求

返回列表 來源:本站 發(fā)布日期:2024-11-01 09:49:38【

激光共聚焦顯微鏡對于樣品的要求較為嚴(yán)格,具體包括但不限于以下幾個方面:

一、樣品類型與制備

生物樣品

需在熒光顯微鏡下觀察熒光表達是否正常,以確定是否有必要使用激光共聚焦顯微鏡。

蓋玻片厚度要求≤0.17mm,以確保光線的透過性和成像的清晰度。

標(biāo)本需要貼壁良好,不能懸浮,且需要在載玻片上固定好后送樣測試。

樣品需要加抗熒光淬滅劑,以保護熒光信號不被淬滅。

激光共聚焦顯微鏡VSPI.jpg

材料樣品

主要測試偏材料的樣品,且樣品需提前制備好。

樣品尺寸沒有嚴(yán)格要求,但B須平整,以確保成像的均勻性和清晰度。

拍出來*大面積為1.11×1.8mm到5×5mm范圍內(nèi),顏色可調(diào)。

二、樣品處理與標(biāo)記

熒光探針標(biāo)記:樣品需要經(jīng)過熒光探針標(biāo)記,以便在激光共聚焦顯微鏡下進行觀察和成像。

固定與活細胞:對于固定的或活的組織、貼壁培養(yǎng)細胞,應(yīng)培養(yǎng)在Confocal小培養(yǎng)皿或蓋玻片上。懸浮細胞則需要甩片或滴片后用蓋玻片封片。

載玻片與蓋玻片:載玻片厚度應(yīng)在0.8~1.2mm之間(某些要求中載玻片不參與成像,因此厚度可能不是關(guān)鍵因素,但蓋玻片需光潔且厚度在0.17mm左右)。蓋玻片應(yīng)光潔無雜質(zhì),以確保成像質(zhì)量。

三、樣品特性與成像要求

樣品厚度:標(biāo)本不能太厚,因為激發(fā)光大部分會消耗在標(biāo)本下部,導(dǎo)致物鏡直接觀察到的上部不能充分激發(fā),從而影響成像效果。

激發(fā)波長與發(fā)射波長:需要明確樣品的激發(fā)波長和發(fā)射波長,以便選擇合適的激光光源和濾光片進行成像。

掃描區(qū)域與參數(shù):對于需要重構(gòu)的樣品,需要明確掃描區(qū)域大小、位置和Z步進等參數(shù),這些參數(shù)會影響測試時間和成像質(zhì)量。

四、其他注意事項

封片劑:封片劑多用甘油與PBS混合液(如9:1的比例),以保護樣品并防止熒光信號淬滅。

樣品穩(wěn)定性:樣品在測試過程中應(yīng)保持穩(wěn)定,避免移動或振動,以確保成像的清晰度。

樣品清潔度:樣品表面應(yīng)保持清潔無雜質(zhì),以避免影響成像效果和造成儀器污染。

綜上所述,激光共聚焦顯微鏡對于樣品的要求涉及多個方面,包括樣品類型與制備、樣品處理與標(biāo)記、樣品特性與成像要求以及其他注意事項等。只有滿足這些要求,才能獲得高質(zhì)量的成像結(jié)果和準(zhǔn)確的實驗數(shù)據(jù)。

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