激光共聚焦顯微鏡檢測時對樣品確實有特殊要求,這些要求因樣品類型和檢測目的的不同而有所差異。以下是對樣品特殊要求的詳細歸納:
一、生物樣品
熒光表達檢查:先在熒光顯微鏡下觀察熒光表達是否正常,以確定是否有必要使用激光共聚焦顯微鏡。
蓋玻片厚度:蓋玻片厚度要求≤0.17mm,以確保圖像質量不受影響。
激發(fā)與發(fā)射波長:需要明確樣品的激發(fā)波長和發(fā)射波長,以便選擇合適的激光器和濾光片。
掃描參數:若需重構圖像,需明確掃描區(qū)域大小、位置和Z步進等參數,這些會影響測試時間。
樣品固定:共聚焦顯微鏡所需的標本B須貼壁良好,不能懸浮,需要在載玻片上固定好后送樣測試。同時,樣品需要加抗熒光淬滅劑,蓋玻片也需要固定。
二、材料樣品
樣品制備:主要測試偏材料的樣品,樣品應提前制備好。
尺寸與顏色:拍出來Z大面積為1.11×1.8mm到5×5mm范圍內,顏色可調。樣品尺寸沒有嚴格要求,但B須平整。
三、其他類型樣品
細菌樣品:對于需要死活染色或ROS染色的細菌,建議加冰袋泡沫盒4℃保存,確保樣品與冰袋不直接接觸。
蛋白或多糖類樣品:同樣建議4℃保存于冰袋泡沫盒中,或選擇5%戊二醛固定后保存。
污泥類樣品:可進行冰切或刀切處理。
塊體類樣品(如金屬、瓷磚、巖石等):尺寸長寬高不超過1cm;薄膜類直徑不超過2cm,并需保證表面平整,標明拍攝面。建議加冰袋泡沫盒4℃保存,避免樣品與冰袋直接接觸。
植物類樣品:可進行簡單冰切及刀切處理,特殊需求如軟化等請選擇病理組織切片測試項目。常見可測試植物樣品包括淀粉、胡蘿卜、土豆、葉片、根、莖以及擬南芥等。
布料和紙片類樣品:可代為裁剪,直徑默認為15mm。
液體類樣品:送樣量根據測試時樣本濃度和檢測時間點而定,建議寄送單次檢測所需量的3-5倍。若溶劑為有機溶劑(如DMSO、醇類、酚類等),則Z高工作液濃度中溶劑占比應低于5%。
粉末類樣品:送樣量根據實際需求而定,需注明溶劑種類(對于可溶性粉末)或樣本性質、滅菌方式及分散步驟(對于不可溶粉末)。
四、通用要求
新鮮度:所有樣本B須盡量新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結冰。
標記與固定劑:樣品需經熒光探針標記(可單標、雙標、三標),并使用適當的固定劑和封片劑。
送樣信息:提供清晰的激發(fā)/發(fā)射波長、拍攝類型(2D/3D)、拍攝倍數等要求。若需要特殊染料,請自行提供并附帶染色使用說明書。
綜上所述,激光共聚焦顯微鏡檢測時對樣品的要求涉及多個方面,包括樣品的類型、尺寸、形態(tài)、保存條件以及標記和固定方式等。為確保檢測結果的準確性和可靠性,在送樣前應仔細閱讀相關指南和要求,并按照要求進行樣品準備和處理。