傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的是場光源,標本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射或散射光的干擾;
激光共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點光源對標本內(nèi)焦平面的每一點掃描,標本上的被照射點,在探測針孔處成像,由探測針孔后的光點倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點或逐線接收,迅速在計算機監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。
照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標本的光學(xué)橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。
激光共聚焦顯微鏡是采用激光作為光源,在傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡基礎(chǔ)上采用共軛聚焦原理和裝置,并利用計算機對所觀察的對象進行數(shù)字圖象處理的一套觀察、分析和輸出系統(tǒng)。
把光學(xué)成像的分辨率提高 了30%~40%,使用紫外或可見光激發(fā)熒光探針,從而得到細胞或組織內(nèi)部微細結(jié)構(gòu)的熒光圖像,在亞細胞水平上觀察生理信號及細胞形態(tài)的變化,成為形態(tài)學(xué),分子生物學(xué),神經(jīng)科學(xué),藥理學(xué),遺傳學(xué)等領(lǐng)域中新一代的研究工具。
下面讓我們一起來了解一下激光共聚焦顯微鏡的優(yōu)點吧
1、以激光為光源,在相應(yīng)的熒光探針標記后,對樣本進行逐點掃描,逐層獲得二維光學(xué)橫斷面圖像,具有“細胞CT”的功能,并可通過計算機三維重建軟件支持,獲得三維圖像,并可以任意角度旋轉(zhuǎn),觀察細胞,組織立體形態(tài)和空間關(guān)系;
2、可以對活細胞和組織進行無損傷的觀察,動態(tài)測量細胞內(nèi)的Ca離子濃度和pH值等活細胞生理信息;
3、可對細胞膜的流動性,細胞間通訊,細胞融合,細胞骨架彈性測量等,可用作“光刀子”完成細胞內(nèi)“外科手術(shù)”。這一技術(shù)可以對活細胞和組織進行原位動態(tài)定量的觀察和測量。
與傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡相比,激光共聚焦顯微鏡具有更高的分辨率,實現(xiàn)多重熒光的同時可觀察并可形成清晰的三維圖像等優(yōu)點。