為了清晰顯示PTK7在細(xì)胞膜上的空間分布細(xì)節(jié)，中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所王宏達(dá)研究員團(tuán)隊(duì)和武漢科技大學(xué)陳俊玲博士采用超分辨顯微鏡結(jié)合精確的標(biāo)記方法開展了PTK7組裝的成像工作。

蛋白酪氨酸激酶7（PTK7）作為一種重要的跨膜受體蛋白，參與Wnt和非Wnt信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，影響著細(xì)胞的J性、運(yùn)動(dòng)、遷移和侵襲、組織再生和傷口愈合等。并且PTK7的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移有關(guān)。鑒于PTK7的重要生物學(xué)意義，其研究受到了科學(xué)家們的高度重視。但大多數(shù)研究是從改變基因和蛋白質(zhì)表達(dá)的角度揭示PTK7的生物學(xué)功能，這些方法都是基于大量分子的平均結(jié)果，無(wú)法獲得與PTK7功能相關(guān)的單分子信息。因此，考慮到功能與生物分子組裝的密切關(guān)系，要全面了解一個(gè)膜分子，首先要實(shí)現(xiàn)其精確定位和清晰觀察。共聚焦熒光顯微鏡和全內(nèi)反射熒光顯微鏡已被應(yīng)用于細(xì)胞膜和細(xì)胞中PTK7和Wnt信號(hào)通路的相關(guān)蛋白的分布研究中。但受成像分辨率的限制，所獲得的信息**于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)水平，而非單分子水平。因此，為了清晰顯示PTK7在細(xì)胞膜上的空間分布細(xì)節(jié)，中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所王宏達(dá)研究員團(tuán)隊(duì)和武漢科技大學(xué)陳俊玲博士采用超分辨率顯微鏡結(jié)合精確的標(biāo)記方法開展了PTK7組裝的成像工作。

近年來(lái)，直接隨機(jī)光學(xué)重建顯微鏡（dSTORM）作為一種先進(jìn)的超分辨率熒光成像技術(shù)，突破了光學(xué)衍射J限，獲得了納米級(jí)分辨率，成為細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域不可或缺的成像工具。為保證*終的超高分辨率，標(biāo)記方法的選擇至關(guān)重要。熒光探針具有小尺寸、高特異性和優(yōu)異的光物理性質(zhì)，將有助于準(zhǔn)確定位靶標(biāo)，*終實(shí)現(xiàn)高質(zhì)量成像。采用抗體探針的直接或間接免疫熒光標(biāo)記是生物熒光成像（包括超分辨熒光成像）中常用的標(biāo)記方法。然而，抗體探針的大尺寸和多價(jià)結(jié)合往往會(huì)導(dǎo)致較大的連接誤差、不完全標(biāo)記和聚簇假象。因此，新型熒光探針的應(yīng)用對(duì)超分辨熒光成像至關(guān)重要。

適配體由于其對(duì)靶分子的高親和力和特異性被認(rèn)為是“化學(xué)抗體”。與抗體（如單鏈抗體、Fab）相比，它具有更小的尺寸（通常為20-80個(gè)堿基，~6-30 kda），并且是單價(jià)結(jié)合。因此，適配體探針可以作為抗體探針的理想替代品。

這里，研究人員采用已報(bào)道的可特異性識(shí)別PTK7的Sgc8c適配體，將其與TAMRA連接以形成PTK7的特異性熒光探針。在對(duì)PTK7分布進(jìn)行系統(tǒng)的超分辨熒光成像之前，通過雙色成像和抗體探針單色對(duì)比成像，證實(shí)了Sgc8c-TAMRA的高特異性和標(biāo)記優(yōu)勢(shì)。