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基于適配體熒光探針通過超分辨熒光顯微成像表征PTK7在細胞膜上的分布規(guī)律介紹

返回列表 來源:本站 發(fā)布日期:2023-04-20 09:53:40【

為了清晰顯示PTK7在細胞膜上的空間分布細節(jié),中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所王宏達研究員團隊和武漢科技大學(xué)陳俊玲博士采用超分辨顯微鏡結(jié)合精確的標(biāo)記方法開展了PTK7組裝的成像工作。

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蛋白酪氨酸激酶7(PTK7)作為一種重要的跨膜受體蛋白,參與Wnt和非Wnt信號通路的調(diào)節(jié),影響著細胞的J性、運動、遷移和侵襲、組織再生和傷口愈合等。并且PTK7的異常表達與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移有關(guān)。鑒于PTK7的重要生物學(xué)意義,其研究受到了科學(xué)家們的高度重視。但大多數(shù)研究是從改變基因和蛋白質(zhì)表達的角度揭示PTK7的生物學(xué)功能,這些方法都是基于大量分子的平均結(jié)果,無法獲得與PTK7功能相關(guān)的單分子信息。因此,考慮到功能與生物分子組裝的密切關(guān)系,要全面了解一個膜分子,首先要實現(xiàn)其精確定位和清晰觀察。共聚焦熒光顯微鏡和全內(nèi)反射熒光顯微鏡已被應(yīng)用于細胞膜和細胞中PTK7和Wnt信號通路的相關(guān)蛋白的分布研究中。但受成像分辨率的限制,所獲得的信息**于亞細胞結(jié)構(gòu)水平,而非單分子水平。因此,為了清晰顯示PTK7在細胞膜上的空間分布細節(jié),中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所王宏達研究員團隊和武漢科技大學(xué)陳俊玲博士采用超分辨率顯微鏡結(jié)合精確的標(biāo)記方法開展了PTK7組裝的成像工作。

近年來,直接隨機光學(xué)重建顯微鏡(dSTORM)作為一種先進的超分辨率熒光成像技術(shù),突破了光學(xué)衍射J限,獲得了納米級分辨率,成為細胞生物學(xué)領(lǐng)域不可或缺的成像工具。為保證*終的超高分辨率,標(biāo)記方法的選擇至關(guān)重要。熒光探針具有小尺寸、高特異性和優(yōu)異的光物理性質(zhì),將有助于準(zhǔn)確定位靶標(biāo),*終實現(xiàn)高質(zhì)量成像。采用抗體探針的直接或間接免疫熒光標(biāo)記是生物熒光成像(包括超分辨熒光成像)中常用的標(biāo)記方法。然而,抗體探針的大尺寸和多價結(jié)合往往會導(dǎo)致較大的連接誤差、不完全標(biāo)記和聚簇假象。因此,新型熒光探針的應(yīng)用對超分辨熒光成像至關(guān)重要。

適配體由于其對靶分子的高親和力和特異性被認為是“化學(xué)抗體”。與抗體(如單鏈抗體、Fab)相比,它具有更小的尺寸(通常為20-80個堿基,~6-30 kda),并且是單價結(jié)合。因此,適配體探針可以作為抗體探針的理想替代品。

這里,研究人員采用已報道的可特異性識別PTK7的Sgc8c適配體,將其與TAMRA連接以形成PTK7的特異性熒光探針。在對PTK7分布進行系統(tǒng)的超分辨熒光成像之前,通過雙色成像和抗體探針單色對比成像,證實了Sgc8c-TAMRA的高特異性和標(biāo)記優(yōu)勢。

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