顯微鏡玻片制作方法有以下三種:
1.涂片法
涂片法是將材料均勻地涂布在載玻片上的一種制片方法。
涂片材料有單細(xì)胞生物、小型藻類(lèi)、血液、細(xì)菌培養(yǎng)液、動(dòng)植物的疏松組織、精巢、花藥等。
涂片時(shí)應(yīng)注意:
(1)載玻片必須清潔。
(2)載玻片要持平。
(3)涂層須均勻。涂抹液滴在載玻片中間偏右,用解剖刀刃或牙簽等涂勻。
(4)涂層要薄。用另一載玻片作推片,沿滴有涂抹液的載玻片面(二載玻片夾角應(yīng)為30°~45°)由右向左輕輕推動(dòng),涂成均勻一薄層。
(5)固定。如需固定可用化學(xué)固定劑或干燥法(細(xì)菌)固定。
(6)染色。細(xì)菌用亞甲基藍(lán),血液用瑞氏染液。染色液要蓋住全部涂面。
(7)沖洗。用吸水紙吸干或烤干。
(8)封片。長(zhǎng)期保存用加拿大的樹(shù)膠片。
2.壓片法
壓片法是將生物材料置于載玻片和蓋片之間,施加一定壓力,將組織細(xì)胞壓散的一種制片方法。
壓片法的一般過(guò)程:
(1)取材。觀察細(xì)胞分裂,應(yīng)選取細(xì)胞分裂旺盛、新鮮的組織細(xì)胞為材料。如根尖、莖尖分生組織、骨髓細(xì)胞、花藥(花粉母細(xì)胞)。精巢(精母細(xì)胞)等。
(2)固定。材料固定可根據(jù)需要而定,取材后立即壓片觀察,可不作單獨(dú)固定處理(與染色同步進(jìn)行);取材后不立即視察,可將材料用固定液(一般用醋酸酒精固定液)固定。固定2~24小時(shí)(因材料而異)后用95%乙醇清洗,保存于70%乙醇中,備用。
(3)離析。對(duì)細(xì)胞不易散開(kāi)材料用水解分離液(如1N HCl或鹽酸一酒精液)處理,一般處理6~20min,解離后經(jīng)水漂洗后方能染色。
(4)染色。染色劑種類(lèi)很多。觀察染色體常用醋酸洋紅染色液染色。
(5)壓片。將材料放在載玻片上,加一滴清水或染液,蓋上蓋玻片用拇指輕輕壓片。
(6)觀察。壓片后,即可在顯微鏡下觀察。
3.裝片法
裝片法是將生物材料采取整體封固制成玻片標(biāo)本的方法,用此法可制成臨時(shí)或**裝片。
裝片材料有:微小生物如衣藻、水綿、變形蟲(chóng)、水螅,植物的葉表皮;昆蟲(chóng)的翅、足、口器,人的口腔上皮細(xì)胞等。
裝片法制作時(shí)應(yīng)注意:
(1)手持載玻片時(shí),應(yīng)注意持平,或放在平臺(tái)上。滴水時(shí)水量要適當(dāng),以恰好被蓋玻片蓋滿為度。(2)應(yīng)將材料用解剖針或鑷子展開(kāi)不使重疊,展平在同一平面上。
(3)放蓋玻片時(shí),從一側(cè)慢慢蓋在水滴上,防止出現(xiàn)氣泡。
(4)染色時(shí),將一滴染色液滴在蓋玻片的一側(cè) ,用吸水紙從另一側(cè)吸引,使蓋玻片下的標(biāo)本均勻著色。著色后,用同樣的方法,滴一滴清水,把染色液吸出后,在顯微鏡下觀察。